[求救] 收anaphase的細胞

[ai760721 (~方吉~)]

各位前輩好

小弟目前在做跟細胞核染色體有關的實驗

老闆前陣子要求要看細胞核在mitosis的過程會不會產生異常

主要是在MEF上將某個基因knock-out之後

將細胞種在蓋玻片上 (有用poly-L-Lysine coating過)

然後隔天直接固定染DAPI

但是我怎麼收一整個蓋玻片上都只有少數幾顆在anaphase

因為老闆說至少要算到幾百顆

所以想上來請教一下各位前輩

如何收到較多的anaphase的細胞呢?

謝謝~

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※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1538987140.A.3CE.html
→ xxtomnyxx: 用 inhibitor 把細胞停在特定時期。如果怕 inhibitor
→ xxtomnyxx: 會直接影響分裂造成實驗上的問題，就試試先把細胞同步
→ xxtomnyxx: 在 S 或是 G2 phase，理論上到時應該會有大量細胞同時
→ xxtomnyxx: 進 anaphase
→ turtle24: KO的比例也許沒有預期的高
→ turtle24: 看你實驗的控制組怎麼設計來判讀結果
→ ai760721: KO的部分是有做過IF跟western確認過應該沒問題，然後細
→ ai760721: 胞本身分裂週期大概是30小時，老師的意思應該是就算是沒
→ ai760721: 有KO的細胞應該也要收的到幾百顆anaphase
→ blence: "沒有KO的細胞應該也要收的到幾百顆anaphase"
→ blence: 看起來這老師不喜歡synchronize...照比例應該要觀察上萬顆
→ blence: 才能湊到幾百顆anaphase細胞
推 GG810424: 建議先讓細胞同步（synchronize)，算好時間週期，染DAPI
→ GG810424: 同時請記得也染anaphase 的marker 證明你收到的是anapha
→ GG810424: se 的細胞。