[求救] 關於CRISPR/Cas9

[neven (runthroughthetime)]

各位版友大家好，下禮拜要報seminar了可是期刊實在是真的看不懂

期刊的題目是Vitamin D Switches BAF Complexes to Protect beta Cells

2018, Cell 173 , 1135–1149

圖1A就卡住了，因為我本身是醫療相關的，對於生醫的概念非常非常差

背景知識非常薄弱，這一個禮拜每天努力查詢相關知識可是都還是摸不太清楚

想請教版友的是

https://imgur.com/a/TC8ik4K

1. 這圖1A中 insulin promotor-driven GFP reporter是指用insulin promotor(是

   一個蛋白質? 還是一段基因序列?)當作一個可以表現出GFP的東西，當後續的幹細胞

   有表現出綠色螢光時表示有這個東西?

2. 為什麼在1A的途中最後GFP(+)的 beta-like cell會找到很多dropped out的

   single guide RNAs，而在GFP(-)的beta-like cell中反而會有很豐沛的single

   guide RNAs? 是因為single guide RNAs本來就可以執行讓目標基因gain of funciton

   以及loss of function的功能，所以讓GFP(+) beta like cell的什麼基因

   loss of function嗎?

我知道好像有的版友覺得書不讀懂不應該上來問，但是我是自己真的花了一個多禮拜還是

搞不清楚這些基因工程的意義，所以上來請教版友，若有違反板規的地方也請版主刪文

沒關係，謝謝也打擾各位版友了~

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 1.170.8.179
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1539011729.A.743.html
→ xxtomnyxx: 建議可以把 Figure 1 和 figure legend 放上來。
→ blence: insulin promotor-driven GFP reporter是一段DNA序列
→ blence: 有表現insulin的細胞(如iPSC分化成b-cell後),就會促進這段
→ blence: DNA序列表現GFP(發綠光)，而未分化成b-cell的,就不發光
→ blence: 由於CRISPR/Cas9可以透過不同的sgRNA去關閉特定基因表現
→ blence: 如果有個基因被關掉後，會導致iPCS無法分化成b-cell，那這
→ blence: 個基因的sgRNA，是不是「不該出現」在GFP+的那一群？
→ blence: 另外全身上下除了b-cell以外,幾乎所有細胞都不表現insulin
→ blence: 也就是除了b以外的細胞都不發光,故GFP-這群細胞異質性高
→ blence: 取出來定序的sgRNA也會均勻分布,不像GFP+會有明顯減少
→ blence: 我覺得應該沒有讀不懂不該問的情況,只是有些問題不寫paper
→ blence: 來源,或發問者的專長或程度,自然就認為基礎的問題要靠自己
※ 編輯: neven (1.170.8.179), 10/09/2018 20:04:27
推 lemonteas: 個人覺得從你的文字看起來，生技的背景應該是0，如果是
→ lemonteas: 想大概看懂這篇的結果，看看摘要或是討論就行了，如果
→ lemonteas: 是想弄清楚他的來龍去脈和實驗設計，誒諾，可能有點難
→ lemonteas: 度
推 qiet: 原PO要報seminar這樣有點不OK, 可能要有人當面教你
→ neven: To檸檬茶，我的生技背景跟知識都是0沒錯，而且大學時代
→ neven: 上的分子生物跟現在突飛猛進的基因編輯及技術完全跟不上
→ neven: 不過既然選了也只能盡力的看完他，多認識一點東西是好的
→ neven: 至少這一個禮拜還算享受求知的過程，因為還有幾天可以準備
→ neven: 所以沒有很焦慮。
→ neven: To qiet:不知道有沒有人願意教我，我可以付家教費，真的
→ neven: 有意願的版友可以站內信，謝謝大家
推 inGG4ni: 你在哪？
→ neven: 我在台中喔