[求救] 請問western跑純化 chimera protein

[his198995 (心好痛)]

舉例實驗跑純化的AB chimera protein，為確認protein位置有放control，分別是
A protein和AB chimera protein，但在lane(AB chimera protein)上有跑出一個
A protein 的band和AB chimera protein的band，想知道為什麼。
大家有跑SDS-PAGE先配好膠放冰箱冰overnight後膠跑得比較漂亮的經驗嗎?
大家對這有沒有任何邏輯想法

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→ z27wi:糟糕 硬的是拳頭
→ wei1120:              濕的是眼眶
推 xxxx5566:                        乾的是輸精管
推 heliosheep64:                                軟的是樓下小牙籤
→ DareJ:                       大家好我是軟今天
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推 july81212: 習慣SDS-PAGE 現配現跑 ；Native冰overnight 先pre-ru
→ july81212: n一段再load sample 跑
推 july81212: 然後可能就AB control protein 不純
→ july81212: 先前純化拿時有在跑SEC 確定是單一蛋白嗎
→ Ianthegood: 兩個protein的activity是什麼?
→ xxtomnyxx: 前面的問題需要知道你的蛋白質怎麼純化的，以及你的
→ xxtomnyxx: western 是用什麼樣的抗體。
→ xxtomnyxx: 後面的問題，有一個可能，據說就算 PAGE 已經凝固，其
→ xxtomnyxx: 時分子層面上也還沒有完全 polymerized，放個 o/n 之後
→ xxtomnyxx: 可能因為 PAGE 已經完全 polymerized 所以跑比較好看
→ xxtomnyxx: 純粹猜測
→ his198995: IL21R Fc
→ ganbaba: 感覺是Fc掉下來了
→ xxtomnyxx: 我也覺得可能是 Fc 掉下來了
→ Ianthegood: 有必要就過個gel filtration吧 探究原因不一定有幫助
推 tynse71864: gel 會丟一個晚上/ 但趕時間就丟一小時 RT
推 westernblot5: 冰overnight都蠻好看的 但我是做好了整片膠隔天直
→ westernblot5: 接嘍蛋白 不知道你的配好了是指膠體還是只是液體