[求救] 蛋白質透析

[loveshe331 (penny)]

各位大家好
這幾天再趕著純化透析我的目標蛋白
星期五就要餵小鼠了
但在透析時遇到了很大的問題
透析前可能5.600mg/ml
透析後卻測不太到濃度
我的蛋白分子量約為12.13kD
透析的方式有使用透析袋或濃縮離心管透析
透析袋的MWCO為3500 離心管的話則是3000
透析buffer則是pH7的50 mM PB buffer
透析前蛋白則溶在含300mM imidazole 的elution buffer

這幾天嘗試了好幾次
最先是用PBS以濃縮離心管透析 發現有沉澱的問題
後來改成PB 以肉眼看是看不太出沉澱
故之後都以PB作為透析buffer
但透析的效果還是很差很差

另外想再請教一下
若不透析直接用含有imidazole的樣品
管餵到小鼠體內 是不是會造成小鼠身體的損傷？

再麻煩大家回覆了 謝謝

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推 rasaze: 500mg/ml 的濃度好高阿...
→ milkpa: 做SEC看看
推 Ianthegood: 500??? 確定不是imidazole的signal??
→ loveshe331: 結果真的是imidazole的背景值很高... 謝謝各位囉
→ turtle24: 500mg/ml比芝麻糊還稠啊，你以為戚家上下十三口..(誤
→ loveshe331: 我現在才發現我打錯了...是microliter 不好意思@@
→ Ianthegood: mg/ul????? 看到這個單位你還覺得是你的東西嗎? 這個
→ Ianthegood: 濃度都要結成脫水晶了吧
→ loveshe331: microgram啦 天阿我在幹嘛....
→ IFN113: 如果小鼠吃的不是目標蛋白而是滿滿的imidazole感覺也怪怪
→ IFN113: 的@@" 不然要多加一隻專門吃imidazole的小鼠當ctrl