[求救] ClaI digestion 怎麼樣就是切不動！

[freedomk0115 (賊賊)]

這大概是我cloning以來

遇見最詭異的事了

我要用 Cla I 切我的 plasmid

https://www.neb.com/products/r0197-clai#Product%20Information

但他是dam sensitve的enzyme

所以我有transform到GM21635 strain中（dam-/dcm-）

http://si.secda.info/yb_md/?page_id=1380

還特地拿去sequence

是有ClaI的cutting site序列的


*還一度懷疑是不是enzyme的問題
但後續有跟廠商要postive control
但最後確定enzyme是有活性的

跪求解 是不是我還有什麼地方沒有注意到？


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 27.246.71.56
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推 patricksky: 能否詳細敘述你做的實驗細節? 不然無法幫你判斷
→ blence: ClaI不是設計用在cloning的,你是因為map不適合再自己找的?
→ Ianthegood: 你有看neb的note嗎
推 oceanl: 有遇過ClaI一直切不動的情況 不確定是methylation還是其他
→ oceanl: 因素 建議改用別的限制酶切位
→ Campanella: 遇到跟樓上一樣的情況
→ Ice9: 其他切位切得動嗎？
推 chenmick: 你有幾個切位？band應該要多大？
推 andy544asd: 先找另一個Dam敏感的RE測試是否真的是Dam- cell