看板 Biotech 關於我們 聯絡資訊
各位版大好: 小的目前使用 Digitonin粉末 (Sigma-D141), 並回溶在 ddH2O 中。 由於實驗設計,無法配在 DMSO 或 EtOH 中 當初是按照別篇 paper的步驟,加熱95度10分鐘後,粉末全溶後分裝,也在暫放4度冰箱後? 我是想請問: 1.每次要使用前,都必須重新95度加熱以溶解沉澱嗎? 或是放置室溫一段時間即可 2. 凍在-20度大概可以放多久呢? 還是其實可以放4度即可? 這東西stock配起來有2ml , 我每次只會用1ul阿……是否建議分裝凍,用個兩三次就扔一管 希望有使用過的版友能分享一些心得 謝謝各位! ----- Sent from JPTT on my Sony G3125. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 114.136.253.35 ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1542794558.A.1AB.html
xxtomnyxx: Digitonin 超難搞的,看能不能直接買 commercial 配好11/22 01:12
xxtomnyxx: 的 solution 吧11/22 01:12
不過買配好的溶液,放冰箱還是一樣會沉澱吧? ※ 編輯: tynse71864 (223.137.77.51), 11/22/2018 19:32:44
Ice9: 1、我是放到室溫使用。2、建議stock放-20°C。剛配置完就分 11/25 18:19
Ice9: 裝,用PCR的小管子裝10~20ul。解凍過後放4°C。久未用則丟。11/25 18:21
謝謝 ice大! 想請問你的久是一個月左右嗎?或是更短呢? 謝謝 ※ 編輯: tynse71864 (223.140.178.46), 11/25/2018 21:51:48
Ice9: 約一到兩星期。大多是十天左右吧。 12/04 03:09
tommy770726: Digitonin很穩定 配5-10%放eppendorf存在4度冰箱 12/04 14:40
tommy770726: 要用前微波10-20秒看微波爐功率 比加熱融的快不用到 12/04 14:40
tommy770726: 95度就會全融了 它是固醇衍生物很穩定只怕被微生物吃 12/04 14:42
tommy770726: 我也是買了一小瓶破菌用了兩年還沒用完 12/04 14:44
xxtomnyxx: 最近要回頭試 Digitonin,因而查到一個有趣的 protocol 12/28 20:20
xxtomnyxx: ,這個 protocol 寫把 1g Digitonin 溶到 20 mL 水裡, 12/28 20:21
xxtomnyxx: 加熱到 95~98 度等他完全溶解後,放到 4 度至少 2 天, 12/28 20:21
xxtomnyxx: 之後把沉澱物過濾掉,這樣的 Digitonin 是 5% 的溶液。 12/28 20:22
xxtomnyxx: 所以說對這個 protocol 來說,那些在 4 度沉澱出來的東 12/28 20:23
xxtomnyxx: 西不是 Digitonin 而是雜質? 12/28 20:23
tynse71864: x 大我好像看過你說protocol, 他好像是說市售digitoni 12/30 18:05
tynse71864: n像是個混合物,需要回溶過濾或是再結晶析出的樣子? 12/30 18:05
tynse71864: 總之我試用2/3樓的建議,目前做 IF 染色結果還算一致 12/30 18:06
tynse71864: ,也有預期的結果 12/30 18:06
xxtomnyxx: Sigma 賣的兩種 digitonin 都不是純的,一個直接標明是 12/30 22:06
xxtomnyxx: ~50% (D5628),另一個要輸入貨號去查才知道 (D141),我 12/30 22:07
xxtomnyxx: 的 digitonin 是要拿來做 co-IP 的,純度對我的影響可 12/30 22:07
xxtomnyxx: 能很大,我手上的 digitonin (D141) 這管輸入貨號去查 12/30 22:09
xxtomnyxx: 他寫是 77.4%。我在想需不需要去測試去掉或不去掉沉澱 12/30 22:10
xxtomnyxx: 拿來做 co-IP 的結果如何,雖然我最後是要打 MASS 找未 12/30 22:11
xxtomnyxx: 知的 interaction protein,不過有已知的 protein 可以 12/30 22:12
xxtomnyxx: 用來做 co-IP 成功與否以及效率的 assay 12/30 22:12
xxtomnyxx: 話說,我的 digitonin 買來的直接加水都會先完全溶解, 12/30 22:13
xxtomnyxx: 連加熱都不用就溶得乾乾淨淨,要在 4 度放一陣子後才會 12/30 22:13
xxtomnyxx: 有沉澱,我還很納悶為什麼網路上都說要加熱溶解.... 12/30 22:14
xxtomnyxx: Preparation of Water-Soluble Digitonin 12/30 22:22
xxtomnyxx: https://bit.ly/2GMRzXo 12/30 22:22
tynse71864: 咦D141就那2ml 包裝那管嘛! 我加水沒溶欸……還是有9 01/08 01:35
tynse71864: 5度水加熱 01/08 01:35
※ 編輯: tynse71864 (114.136.202.89), 03/21/2019 21:46:34