[求救] PCR的升降溫速度

[GDCOC (大俠讓三招)]

請教各位熟悉PCR機器的高手

正常的PCR機器應該要在幾秒內的誤差到達指定溫度?

我有使用外接的PROBE偵測well內的實際溫度

我的program是
94c 30s
57c 30s
66c 45s

實際測量發現從94到57的時候，

probe的溫度剛降到61度時，機器已經開始讀秒，

而當probe顯示真正降到57度時，時間已過了15秒以上了，

其他的step也是這樣，大概都要過10-15秒才能真正到達指定的溫度

請問這樣是正常的嗎

因為我做的是multiplex PCR，最近發現很容易出現non-specific band

會是因為機器溫度sensor壞了之類的關係嗎

麻煩高手幫忙解惑了 感謝

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推 hitmd: 我猜應該是機器的特性，防止加熱或降溫過頭，所以接近溫度
→ hitmd: 時會降低速度後逼近設定溫度，至於為何先讀秒就要請廠商問
→ hitmd: 問原廠，是說是哪個廠牌的呢？
→ GDCOC: Cole-Parmer
→ blence: 什麼是"幾秒內的誤差到達指定溫度",是指94到57度的時間?
→ blence: 你是發現機器已經顯示到57度開始數秒,可是實際溫度才61度?
→ blence: 你是認為probe跟機器同時顯示57度時只剩15秒,所以不OK嗎?
→ GDCOC: 對,實際才61就開始數秒,這樣我指定30秒不就沒有意義了
→ GDCOC: 真正作用在57度的時間只有15秒而已
→ GDCOC: 因為沒測過其他牌子也不知道這種情況是不是正常的
→ blence: 先不考慮機器有無問題，純看你的擔憂是多慮了
→ blence: anneal在高溫不會亂黏，低溫才容易有non-specific band
→ blence: 而且就算你認為61->57度不該讀秒,primer就不會偷跑嗎？
→ blence: 還是擔心的話，把anneal設成45秒就不怕時間不夠了
→ blence: 如果是溫度顯示不準確或定溫後會明顯跳動,問題才大
推 Ianthegood: 很多機器可以設ramp 不過會真的去測的你是我聽過的第
→ Ianthegood: 一個 推一個
推 Ianthegood: pcr大概都是peltier element 測溫跟加熱算是一起的
→ Ianthegood:  所以應該沒壞 大概是設計就是這樣 那你也只能在這台
→ Ianthegood: 機器的特性下去修改你的條件(buffer, program,etc)
→ Ianthegood:  所以寫paper才要寫明機器的牌子XD
→ xxtomnyxx: 很重要的一點，PCR 機器沒辦法直接去測sample的溫度，
→ xxtomnyxx: 只能用加熱板上的seneor取得加熱板的溫度，而加熱板的
→ xxtomnyxx: 的溫度並不代表sample的溫度，所以大部份機器跑PCR時才
→ xxtomnyxx: 會要你設定反應體積，這是用來讓機器「估計」加熱板達
→ xxtomnyxx: 到指定溫度時sample理論上要多久才會跟著達到這個溫度
→ xxtomnyxx: ，直接用probe測會不準很正常，PCR溫度校正也都是校正
→ xxtomnyxx: 加熱板的seneor，所以是指定一個溫度後看probe最後的終
→ xxtomnyxx: 點溫度是否和設定一致，而不會去檢測加熱達到指定溫度
→ xxtomnyxx: 時probe的溫度是否正確。
推 jabari: 你拿三個水浴鍋作看看
→ Ice9: 就算拿三個鍋做實驗，還是會有samples升降溫時間問題 XDD
推 Ice9: 另推原PO的觀察實測精神。
推 untilnow: 你的probe有校正過嗎
推 aaaazzzz: 推樓上BIX大的解釋,也對原PO實測溫度表達敬意
→ GDCOC: probe有校驗過喔,另外,我後來找了一台ABI9700來測,
→ GDCOC: 他的升降溫會稍微超過1-2度,然後再拉回來
→ GDCOC: 倒數計時也是差不多到指定溫度才開始計時,不會差超過2度
→ GDCOC: 可能真的是機台設計不同,這樣在使用IVD產品的時候,
→ GDCOC: 更改pragram內容對於實驗室認證會有困擾><
→ GDCOC: 感謝各位的解釋&建議