→ turtle24: 是指學長留下的質體subclone都失敗才想從S17純化質體嗎 01/07 16:15
→ turtle24: 那我會多花一點心思在確認學長的plasmid map正不正確 01/07 16:17
有噢，我是兩邊同步在進行的。原先的菌株抽完質體送定序後的結果，跟學長map中的cut site沒有產生突變，而且digestion後的跑膠結果，band的長度也和預期的差不多，但是怎麼接就是接不起來，盤總是不長colony...。剛好有找到這隻存在S17的基因序列有我實驗需要的片段，所以才考慮要從這隻菌下手，做subcloning。
→ turtle24: 重新塗盤挑幾個菌落切切看酵素跟map有沒有一致 01/07 16:18
※ 編輯: Faustus73 (39.9.138.29), 01/07/2019 16:32:31
推 agagy: 同上，序列跟抗性一定要對，做cloning最怕用前人的材料了 01/07 16:40
→ agagy: insert有確認過的話，那vector呢？長爆的話可能是單一切點 01/07 16:45
→ agagy: 所以自接？ 01/07 16:45
→ turtle24: 如果有人帶著做troubleshooting會比較快知道原因 01/08 09:26
→ turtle24: 沒人帶的話控制組跟紀錄本都要妥善，至少老師能幫你看 01/08 09:27
推 MADAOTW: transformation後挑菌前, 用 Protoplasting assay 看到 01/13 13:34
→ MADAOTW: 底是不是正常的 insert 01/13 13:34
→ MADAOTW: 最好的情況是能挑20顆以上clones 作初篩 01/13 13:44
→ blence: 別亂教叫人挑這麼多顆好嗎？這樣不叫troubleshooting 01/13 14:44
→ xxtomnyxx: 會成功的 cloning，挑 1 顆，最多 3 顆就該挑到正確的 01/13 17:09
→ xxtomnyxx: clone 了，不會成功的 cloning，你挑 100 顆，就算給你 01/13 17:09
→ xxtomnyxx: 挑到了 1 顆正確的，你將來還是不會做 cloning。 01/13 17:09
推 Ianthegood: 我覺得很多e coli裡面發生的事情都還未知 多挑幾顆真 01/14 04:09
→ Ianthegood: 的無妨 我colony pcr一次也都一盤XD 01/14 04:09
→ blence: 如果挑出的clone除了on target外容易有off target,是需要 01/14 10:51
→ blence: 多挑幾顆,如果都是可預期的no target,怪菌Ecoil是無辜的 01/14 10:53
→ Ianthegood: 隨手狗了一下 s17是cloning strain沒錯啊 所以B大說得 01/14 17:03
→ Ianthegood: 對 Ecoli是無辜的 01/14 17:03
→ turtle24: 學生挑20個菌結果我被老闆洗臉… 01/15 08:14
→ turtle24: 我自己是挑6顆，定序送2顆 01/15 08:15
→ turtle24: 可是學生不是我帶的… 01/15 08:16