[求救] serum free medium pH 值

[tynse71864 (TATA box)]

各位好，

目前使用 RPMI (serum free) 做實驗

配置時有先調到 pH7.0, 小蘇打也有加

也額外加至15mM的 HEPES了

配完後分裝到50ml tube,每次使用也都盡快蓋上，用完也封 paraffin 冰了

但大概做實驗2-3次就變粉紅色了…
(pH跳到大概8.5)

想請問有沒有延長讓他不要變鹼的方法呢？


PS.我自己養細胞用的 +FBS medium,變色速度就慢很多……一罐500ml 快用完才變

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→ blence: pH7.0是指分裝到50ml tube時測的?
我是配 medium時測，過0.22後立刻分裝的，大概變成pH7.2?

推 joseph103331: 丟到培養箱一陣子pH應該會回來,pH影響很大嗎?
推 tpst6603: pH值應該是配合CO2濃度變化的，可以放到培養箱裡面看看
→ tpst6603: ？
影響算大，我要看kinase磷酸化用，實驗大概就5分鐘內...
pH如果跳掉會影響活化效果

是可以丟培養箱看看，但那可能也要丟上一兩個小時?
想到就有點麻煩...但可以試試

原本想用Opti-MEM覺得比較耐撐 (因為目的是要serum free)
但分裝到50ml後用個一兩次pH一樣跳到8以上囧
※ 編輯: tynse71864 (123.193.43.81), 03/27/2019 02:11:59
→ andy0313: 用dish裝丟incubator一下子就回來啦...
推 joseph103331: 養細胞的時候加一盤medium一起放就好啦,還不用回溫
推 steve42125: 推先丟培養箱 在一般環境serum free pH真的跳滿快的
好的我來試試看  謝謝大家啦！

0331：  我後來取了1.5ml放在 3cm dish 中，放了大概2-3 小時   pH 測起來還是在8左右
※ 編輯: tynse71864 (123.193.43.81), 03/31/2019 12:12:52
→ blence: 用一般PBS或HBSS也是serum free,pH會明顯變化嗎？
→ blence: 實驗只要5分鐘,跟RPMI比應該沒差,如果離子也不影響kinase
PBS 我用起來pH 沒特別差 (HBss沒試過)
但畢竟是活細胞活化，可能還是有一些不知道的離子差 (比如 Calcium?) 文獻也幾乎沒看到用 PBS 的 ，真要使用有點怕

推 captdavince: 等一下，你有調ph，怎麼調? 一般來說不特別調的，
→ captdavince: 直接用co2飽和的小蘇打就會穩定了。
→ captdavince: 你是照BCRC建議的配培養基的方式嗎?
我家用 Gibco的 RPMI 164powder, 該廠牌說明書是建議除了小蘇打外(此時pH約8.2)，還要用 HCl調到7.0左右才算能過濾
※ 編輯: tynse71864 (223.136.137.84), 04/04/2019 19:19:49
推 ChloeClark: 嘗試不要一次分裝50毫升，改成小分裝，例如3管15毫升
→ ChloeClark: ，減少培養液暴露空氣或反覆升降溫的次數，會不會好一
→ ChloeClark: 些呢？
這我試過了，後來發現有些廠牌的 tube 特別容易變色………XD  換了廠牌有稍微沒那麼誇張啦
※ 編輯: tynse71864 (223.136.150.60), 05/12/2019 14:35:14