→ feather2: 文中的第一次和第二次都是指後面的acetone/methanol操作 04/26 23:33
→ Ianthegood: sonication? 04/27 00:21
推 joseph103331: 1% SDS + beta-mercap 95度作用應該可溶 04/27 01:51
推 tynse71864: 之前TCA沉澱是 acetone洗完放hood 10分鐘就加 sample 04/27 02:59
→ tynse71864: bfr煮10分鐘，會溶完; 但我的 pellet都米粒大小而已 04/27 02:59
推 Ianthegood: 除非上2D不然我都寧願dialysis+amicon XD 04/27 03:50
→ Ianthegood: sds應該比較強, 1%不夠就2%, 但是你的protein就肯定 04/27 03:51
→ Ianthegood: 死光 04/27 03:51
推 july81212: 你是要做 in solution digestion嗎 04/27 09:30
→ july81212: 如果是不用再沈澱 直接稀釋到1M以下GnHCl就可以繼續了 04/27 09:30
→ july81212: 高鹽狀況下直接用有機溶劑沈澱通常鹽也會一起析出建 04/27 09:30
→ july81212: 議真的沒辦法就先desalt 在往後做沈澱 04/27 09:30
→ feather2: 因為digestion後還要做一次化學真對NH2的修飾 這步驟要 04/29 11:18
→ feather2: 去掉前一次修飾的填加物 就算dilute直接trypsin 勢必要 04/29 11:18
→ feather2: 再沉澱一次 04/29 11:18
→ feather2: 如果先dilute降低GnHCl再沉澱會否讓鹽不會一同沉澱 就比 04/29 11:20
→ feather2: 較好溶 但是methanol不是應該把鹽都洗掉嗎? 04/29 11:20
推 july81212: 這樣的話digestion 完用C18 desalt或是第一個修飾找看 04/29 22:35
→ july81212: 看有沒有chemical 可以quenching (IAA可以用DTT)metha 04/29 22:35
→ july81212: nols 造成的鹽析出會跟蛋白喇在一起 然後整塊硬掉 稀 04/29 22:35
→ july81212: 釋是一個解可是稀釋後沈澱回收變比較低可以的話用其他 04/29 22:35
→ july81212: desalt 放是比較好 04/29 22:35