推 maurice9325: 你有沒有檢查IPTG有沒有壞，會不會是沒有被induce? 04/29 01:43
推 july81212: Pellet 檢查一下 可能掉去inclusion body 04/29 09:22
推 joseph103331: 樓上兩個都超有可能XD 04/29 14:33
推 Ianthegood: 或甚至是兩個綜合 上一管iptg掛了所以你一直都用比較 04/29 21:39
→ Ianthegood: 低的濃度在induce 新一管濃度對了就把蛋白全部推到ib 04/29 21:39
→ Ianthegood: 裡面XD 04/29 21:39
推 huuban: I大這描述XDD 04/29 23:59
推 joseph103331: 我覺得這個論述很可以 很真實XD 04/30 11:28
→ Ianthegood: 自己養屎汁也養好一陣子了該碰到的都碰過了XD 04/30 19:30
→ yayayoyi: 我有positive control，IPTG沒問題，也沒在pellet裡面.. 04/30 23:33
→ yayayoyi: . 還有什麼可能嗎… 04/30 23:33
→ Ianthegood: 表現太好啊 降低iptg試看看 04/30 23:37
→ yayayoyi: 之前都是用固定的濃度呀…，好哦明天做一波篩看看濃度.. 04/30 23:41
→ yayayoyi: . 04/30 23:41
→ GG810424: 先檢查有無表現，再看是在pellet還是supernant，有表現 05/01 01:23
→ GG810424: 表示IPTG無問題。 05/01 01:23
→ GG810424: 降低induction 濃度至0.2mM IPTG 05/01 01:24
→ GG810424: 時間調整至16度C 14-16小時 05/01 01:24
→ GG810424: 破菌盡量用French pressure 05/01 01:25
→ GG810424: 基本上只要有表現，後續各種purify 方法都能得到蛋白， 05/01 01:27
→ GG810424: 像是用Urea 破inclusion body，先Denature 再refolding 05/01 01:27
推 GG810424: IPTG: 0.2*238.31*0.01=0.476g 05/01 01:30
→ GG810424: 溶在10ml ddH2O,過0.22 micrometer filter 05/01 01:31
→ GG810424: Stock 0.2M , working 1000倍稀釋成0.2mM 05/01 01:32
→ GG810424: 若這樣做還有問題歡迎站內信洽詢，能幫的都會盡量幫。 05/01 01:33
→ GG810424: 記得要Re-transform 到BL-21 (DE3) ;DH5a是用來萃取plas 05/01 01:36
→ GG810424: mid DNA不能表現蛋白質 05/01 01:36
→ GG810424: 還有解凍的菌液很容易跑到inclusion body 05/01 01:37
→ GG810424: 盡量每次要純化蛋白都要重新re-transformation 05/01 01:38
→ GG810424: 要把純化蛋白的過程，做的像製程一樣穩定。每一個環節 05/01 01:39
→ GG810424: 都趨近於100%一樣。 05/01 01:39
→ GG810424: 這樣純化出來的蛋白，不同的Batch才會Quality control 05/01 01:40
→ GG810424: 很穩定。 05/01 01:40
→ jinshiG: 重新晝菌了啦！ 06/14 08:17