作者steve42125 (Shiburin)
看板Biotech
標題[求救] xenograft tumor model with matrigel
時間Sun May 5 23:10:43 2019
大家好
最近要用nod.scid小鼠打皮下做in vivo tumorigenicity
在細胞數配置流程的部分有問題想請教大家
懇請有經驗的各位分享和解答
會用兩種處理，兩種細胞數(10^5和10^6)的細胞數各打4隻
然後預計會跟matrigel 1:1混合用total 100ul的體積打進去
１、細胞配置的部分
我的想法是：細胞用Accutase打起後用4倍體積Serum free medium終止反應，直接進行細
胞計數來得知細胞總數後離心（1250 rpm, 3 mins）一次
離心後加入以適量PBS把細胞回溶成2*10^7/1ml，
然後直接在eppendorf中跟matrigel混合配成需要的總份數
(例如我打4隻，那就配250ul cell+250ul matrigel, 5*10^6 in 500ul 1:1 matrigel
100ul/mouse)
２、看有人是把細胞resuspend在PBS也有Serum-free medium
想請問兩個在使用時機上有很大的差別嗎？以我的model應該用哪種才適當呢？
２、由於要跟matrigel混合所以混完一定要放在冰上，
這樣我就讓細胞液冰冰的直接打到小鼠皮下？
３、因為要在實驗室配了細胞再拿到動物中心去打
這樣我的細胞要在哪個時間點移到針筒裡然後要怎麼移？
我的想法是在實驗室用eppendorf裝混好matrigel的細胞液放在冰上，
到動物中心再進hood用針筒吸100ul然後直接打，不知道我的想法有沒有錯？
第一次做動物實驗，盡可能的參考了一下各種的protocol，
但是細節上面沒有相關的操作經驗，
如果問了很愚蠢的問題還請各位見諒，
懇請各位的解答及經驗分享，謝謝！
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推 qiet: Matrigel在二十幾度就會開始變成gel, 所以細胞液和針筒最好 05/05 23:40
→ qiet: 都放在冰上. 05/05 23:41
→ qiet: SF medium/PBS 通常難長細胞我都用medium, 好長的隨便用!!? 05/05 23:42
→ qiet: 參考用同樣細胞株的reference試試 05/05 23:44
→ qiet: 記得多配不要配剛好, 針筒的dead volume和matrigel的特性會 05/05 23:45
→ qiet: 讓你損失很多體積, 如果先在lab混好細胞記得打之前還是先混 05/05 23:45
→ qiet: 勻 05/05 23:46
推 tynse71864: 同上，建議多配1-2組。針筒的那個頭……… 05/05 23:53
推 MDCCLXXVI: 我多配到0.4ml matrigel光是黏在eppendorf就損失很多了 05/06 14:41
→ MDCCLXXVI: 會碰matrigel的東西都要先預冷 超過10度gel開始變果凍 05/06 14:43
謝謝樓上三位的熱心分享，確實我沒考慮到針筒Dead space的問題，
看起來我確實得多配幾份，真的很謝謝大家~
※ 編輯: steve42125 (120.126.49.54), 05/06/2019 15:40:22