[求救] 大分子小分子同一張Western membrane

[paul820612 (正經人)]

大家好

今天老闆叫我做一張Western

要把小分子(約16KD)還有大分子(大約110KD)跑在同一張membrane裡面

實驗室用的是7.5%的gel

transfer 條件是100V 1hr

現在查到的資料都沒有說怎麼跑在一起

不知道有什麼建議嗎?


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推 littleQwQ: %數應該要依照分子量做調整 如果你要跑同一張的話 依你
→ littleQwQ: 的狀況應該要調整至12% 110kDa直接剪75或100以上
→ trumpet: 如果大分子先跑，小分子後跑呢？
推 tynse71864: 12% 跑，  我之前壓 15& 130kda的沒問題； transfer時
→ tynse71864: 間拉長些讓大分子好過去就是
推 ampicillin: 跑gradient gel阿
推 steve42125: 16跟110跑同一張gel 沒問題很好分開
→ steve42125: 建議可以跑10~12%的gel 基本上不用擔心跑不開 差很多
→ steve42125: 而且membrane還可以很豪邁的剪不用怕剪到band
推 rasaze: 用一般commercial gradient gel都辦得到吧？
推 tynse71864: 沒錢可以自製8+12% step gel  啦，看你要多美
→ Qaaaa: 不在乎美觀的話 單一10% gel你這個kd範圍還可以接受
推 BGG: 市售的 gradient gel,都可以啊！Transfer 用濕式，效率比較好
推 maurice9325: 用gradient gel 或配12%+7.5% gel 結案。
推 MADAOTW: 大分子還是要拉開的，要省麻煩就自己搞 gradient