[求救] primer濃度誤差

[sianpa00 (ccc)]

     最近訂了一批primer，以往都造著datasheet給的回溶體積來回溶，但最近學長說把
回溶完的primer拿去nanodrop測會發現廠商給的回溶體積是不準的，我實際測完也發現差
了將近兩倍，想請問一下大家，primer濃度會影響到qPCR的準確性嗎？
    我個人是以為只差在太多專一性不好,太少可能跑不出來而已？，但學長說準確性會
有差，這樣是否以前做的data都有疑慮QQ,想請問大家的意見！

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.54.111 (臺灣)
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→ blence: 專一性跟準確性差在哪裡？
阿！ 忘記說他的建議回溶體積都比較多，所以濃度應該比較低，所以應該只會有跑不出
來的問題？
※ 編輯: sianpa00 (140.112.54.111 臺灣), 08/16/2019 16:29:01
推 Ianthegood: 首先你如果primer是訂desalting 那裡面本來就會有不
→ Ianthegood: 純的小片段 再來第一代的nanodrop其實不準到靠北 第三
→ Ianthegood: 不管怎樣你的primer都得拉過standard curve才能拿來定
→ Ianthegood: 量啊
所以直接用nanodrop來定量是不對的？
我應該相信data sheet上的定量對嗎？
※ 編輯: sianpa00 (27.242.130.58 臺灣), 08/16/2019 21:22:03
推 Ianthegood: 不要管定量 總之用同一組同樣量的primer拉standard cu
→ Ianthegood: rve跟sample
推 qiet: 差兩倍也差太多? 是選ssDNA定量嗎?
推 dubius: 不管廠商合成的濃度或你用nanodrop測定的都是不準的
推 dubius: 但您問的是引子濃度是否會影響qpcr 答案是會 但不一定
推 dubius: 您可以作一個前後因子分別2倍序列稀釋的測試矩陣
→ dubius: 就可以解答你的問題
推 darkbishop: 真的想知道的話 可以用Qubit 非常準