[求救] ELISA數值越做越低

[kevinlee075 (逐夢彗星)]

小弟最近拿先前收的病人plasma來做ELISA，我們家用的是R&D的96 well kit
並且抽同事的plasma做為盤跟盤的control來進行校正
我的所有samples，包含ELISA操作過程的capture Ab、Standard、Detective Ab等，都有進行分裝冰-80
(有些要求只能冰4度的也都要照做)
而control在抽完血當天也有進行不同倍率的稀釋和分裝
每次ELISA的materials和control都是從-80拿新的一個分裝管
檢體頂多也只有重複解凍一兩次
另外由於plasma太濃，每次做的時候檢體有做50倍稀釋(每次都稀釋一樣倍率)
但最近做了幾次發現無論是control或是所有的檢體OD一次都比一次低(所有操作過程都一樣)
第一次各個檢體普遍在1點多，第二次掉到0.4~0.7左右，最近這週做卻更掉到0.2~0.3左右
甚至這星期做的stadard數值也開始降(但每次R平方都還是有達到0.995以上)
本來想說是來回解凍的關係，但連同control數值都在掉實在無法解釋啊啊啊
有人有過類似的經驗嗎？
想請問我可能哪個環節操作有問題？該如何改善？

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推 Ianthegood: 溫度？就算有降，control內插拉出來的數字是對的嗎？
→ kevinlee075: 溫度的話都是放室溫反應。內插後發覺control的數字
→ kevinlee075: 也跟著降，就好像所有東西都在degrade的感覺@@
推 tynse71864: TMB 壞惹 (？)
→ ganbaba: blocking buffer有沒有問題啊？
→ kevinlee075: 我blocking buffer每次都重配，甚至連PBS都重配了，
→ kevinlee075: sample也都取新的分裝管來做，結果standard curve很
→ kevinlee075: 完美，但所有sample的數值仍然只有0.1~0.2(有做和之
→ kevinlee075: 前一樣倍率的稀釋，但之前數值明明可以達到1左右啊
→ kevinlee075: )
→ kevinlee075: 這是今天的結果，左邊三行是standard，由上而下濃度
→ kevinlee075: 遞減
→ kevinlee075: https://i.imgur.com/YcAo3SB.jpg
推 jabari: 買新冷氣
推 machin: 不是substrate壞了，就是plasma壞了
推 poison7202: elisa reader 壞惹
推 j64002156: ELISA的燈泡有壽命 可以請工程師看看 我之前做也是不
→ j64002156: 同週有不同讀值 說是燈泡問題