[方法] CRISPR/Cas9 KO細胞與HDR plasmid?

[hachibuya (黃金騎士 牙狼)]

剛剛投的文章收到revise

實驗室一直以來都是用siRNA 和 shRNA做 knockdown 細胞

沒想到reviewer之一覺得siRNA已經過時了 要求用Crispr/cas9做knockout

上網查發現santa cruz有賣做好的CRISPR/Cas9 KO plasmid

買了plasmid後接下來看起來好像不是很難

transfection進到細胞後再用FACS把發光的細胞篩出來即可

但是看了santa cruz的protocol建議也要同時transfection HDR Plasmid

HDR Plasmid也很貴 等於要買兩個 plasmid

想請問有經驗的人沒有HDR Plasmid 是DSB的修復會出問題 影響的是效率而已

還是說一定要有HDR Plasmid? 謝謝

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→ a90648: 根據官網上的說法是幫你塞進去RFP 和Puro讓你可以篩選
→ blence: 時間不夠的話,其實不用花這個心思去做
→ blence: 而且你是用siRNA而不是shRNA或Cre KO,想要用CRISPR來驗證
→ blence: 的話,也應該是用dCas9的CRISPRi,而不是Cas9的KO
推 qiet: 應該先想想怎麼說服他你們的實驗就足夠證明假說吧
推 jabari: 同意樓上...新潮的東西就是錢...哪有那麼有錢來Q皿Q
推 yujutw: 沒有HDR的話 就是靠NHEJ的隨機mutation把該基因knockout
推 datro: 推薦你找RNAiCore服務