[求救] western 的band長短不一

作者pk1512 (Marshall Wang)

看板Biotech

標題[求救] western 的band長短不一

時間Wed Sep 25 17:31:26 2019

實驗室用的快速膠，在製膠的過程中是用dropper加的，過程加的也算均勻，不過中間有些? 然後在running跟transfer的過程也算順利 Transfer時除了一開始buffer不夠以外後續就是洗再來加抗體，這次用的是分子量37的GAPD 但是在ECL成色出來的結果band的大小很不均勻而且中間那條band還特別長特別大還往上跑原因可能是哪些？拜託求救，失敗很多次了 ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.115.48.183 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1569403888.A.5F5.html

推 tynse71864: 樣品體積都一樣嗎？ 09/25 19:42

對沒錯就是那個快速膠，至於樣品體積你是說打入well的體積嗎？沒有欸，每個樣品配出來

→ tynse71864: btw 原 po 買的是 TGX 快速膠嗎 09/25 19:43

推 bob79620: 看到圖回憶起我大學的Data09/25 20:48

※ 編輯: pk1512 (117.19.213.82 臺灣), 09/25/2019 23:57:59

推 MLSHBen: 以前實驗室是教用等重的protein sample和sample buffer配 09/26 02:10

→ MLSHBen: 好跑電泳的sample後，用1x sample buffer把體積調至一樣 09/26 02:10

→ MLSHBen: ，這樣才不會體積大的band擠到旁邊體積小的band 09/26 02:10

→ MLSHBen: 快速膠沒用過就不知道是不是那個的問題了 09/26 02:12

推 darrenyo: 同樓上樣品體積不同的話補1X sample buffer 調到一樣 09/26 10:40

→ frwd: sample 調成同濃度同體積,這樣在load sample 直接取同量體積 09/26 14:57

→ frwd: 可試 stacking running 時間加長,跑慢,之後調正常running 09/26 15:00

※ 編輯: pk1512 (140.115.48.183 臺灣), 09/26/2019 15:12:39

推 tynse71864: 調一下體積至相同就可解決了，我之前是卡在 transfer 09/26 15:15

→ tynse71864: 3分鐘 20k以下全部不見了，後來發現是 transfer tank 09/26 15:15

→ tynse71864: 問題; 跑膠部分則沒有狀況 09/26 15:15