[求救] 脂肪肝之細胞模式建立

[honey823 (...)]

         我們實驗室想建立脂肪肝的細胞模式，目前使用HepG2細胞,
         餵食OA-BSA的medium, 造成脂肪堆積，來當成脂肪肝的細胞模式
         (參考有的paper是這麼做的)
         但是目前碰到一些問題

    (1)  我們用的OA-BSA是直接買sigma的oleic acid(100mM OA in 100% ETOH)
         與FFA-free BSA (2M in PBS)回來配製的, 以6 mM OA/1M BSA (6:1)的濃度
         加入細胞培養24~48小時之後, 用Oil-Red-O staining來觀察lipid droplet
         目測的染色有差異, 用isopropanol溶解後, 去測OD 510的吸光值
         但是與control組比較起來, 並沒有明顯的差異

    (2)  有查到文獻說, 這樣的處理會引起oxidative stress, 我們也用DCHDA染色
         再上flow來觀察, 但是也沒有明顯的差異
         想請教版上是否有做類似實驗的經驗,
         是否有推薦induce 脂肪堆積的OA-BSA或者PA-OA的配方呢?
         (當初有嘗試以PA來做，但是PA的溶解度是個很大的問題跟挑戰)
         以及我們的實驗方法是否有誤, 有需要改進的地方呢, 謝謝

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推 tynse71864: 我當初做 Huh7 是用1% FFA-BSA跟 100mM OA , 用 BODIP
→ tynse71864: Y 染也有差異; 但我的 OA 是溶在20%MeOH
→ tynse71864: OD 510是不是會測到其他東西啊？ 我之前是用顯微鏡一
→ tynse71864: 群一群拍， 然後定 LD 的量
→ tynse71864: (註： 我的目的是看 VLDL secretion)
推 yuasa: 第一點:final濃度是多少?細胞種了多少用多少isopropanol溶?
→ yuasa: 做了幾個重複?
→ yuasa: 第二點:OA相對於PA毒性小很多，所以要測到oxidative stress
→ yuasa: 或cell death的劑量要用更高。原因之一是OA更容易形成TG儲
→ yuasa: 存在lipid droplets。PA沒有形成那麼多油滴但細胞死得快
→ yuasa: 要溶PA在BSA溶液裡需要加熱、加NAOH及讓它們充分時間結合
→ yuasa: 你可以找protocol或者是我可以很不要臉地推薦自己的論文XD
→ honey823: 感謝樓上兩位的經驗分享。其實本來是想說有沒有做相關
→ honey823: 脂肪肝細胞模式的實驗室，有protocol可以借我們參考的
→ honey823: yuasa大可以提供您的大作給我們參考一下嗎，謝謝
推 Ianthegood: 借問一下 lipid secretion的機制找到了嗎?
推 yaes111: oil red o 染完較容易殘留 建議你選用其他方式染色定量
→ yaes111: 除非差異真的很大 OA要有大量堆積 可能要你的2-3倍劑量
推 yaes111: 看錯 以為你是用100uM
推 st110261: 環境氧氣濃度沒有控制嗎？
推 tynse71864: I 大是說 hepatocyte嗎
推 Ianthegood: 是的 跟肝不熟
→ yuasa: 站內信我。不然我怎麼給你我的論文
推 money1015: 用oa/pa的複合配方效果不是會比較好嗎？