[求救] clonogenic assay seeding

[bahrimank (aten)]

各位前輩好，不才最近剛開始操作clonogenic assay

遇到關於種植極少數細胞的困擾

想請問各位有經驗的前輩的經驗，或是我可以如何改進

先謝謝各位前輩了


目前實驗步驟:

將細胞打下後，離心重新回溶1ml medium (此稱原管)

取100ul 原管細胞液+900ul medium配成管1，以管1來計算細胞

管1通常細胞算出來會在3*10^5 cells/ml

再將管1做10X稀釋成3*10^4 cells/ml (100ul 管1細胞液+900ul medium，此稱管2)

我是將細胞種在6 well, 每well種100顆或200顆細胞，以種植100顆cell為例

我會在新eppendorf裡，取33ul 管2細胞液(1000顆cell) +967ul medium

配成100 cells/100ul (此稱管3)，將管3取100ul 細胞液進6 well內，

最後再補2ml medium，集結束種植

有確認每次取細胞及稀釋前都有充分pipetting

但是seeding的細胞數都不到原訂的1成(需要種100顆cell只有長出不到10個colony)

(細胞沒有經過藥物或是任何刺激處理)

想請問各位前輩能不能提供給不才一些建議和經驗分享呢?

非常感謝各位前輩撥冗觀看的我問題，謝謝大家

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→ xxtomnyxx: 種多長少很正常，雖然有細胞種類之間的差異，但是單顆
→ xxtomnyxx: 細胞周圍沒同伴本來就孤單寂寞覺得冷很容易死。
→ xxtomnyxx: 看你實驗的目的是什麼吧？你可以試試提高細胞量，測幾
→ xxtomnyxx: 個濃度範圍後選長出來的colony數量密度符合你需要的條
→ xxtomnyxx: 件來做
→ xxtomnyxx: 或是可以試試看用conditioned medium養，細胞密度太低
→ xxtomnyxx: 可能讓medium中缺少某種細胞分泌的生長因子，用
→ xxtomnyxx: condictioned medium或許可以解決
→ turtle24: 細胞有時喜歡貼在牆邊，用顯微鏡找找
推 Ice9: 加 1/4 細胞打下前的 medium 養看看，讓它有附近有同伴的錯
→ Ice9: 覺。
→ bahrimank: 好的，謝謝各位前輩的建議，我會試試看的^^