→ retawh: 推 01/22 13:35
推 grassshan: 推！老掉的3T3L1請直接放生～加分化液或是換飼料（？） 02/20 22:25
→ grassshan: 的時候務必溫柔沿著well邊邊加下去再輕輕晃均勻R。人生 02/20 22:25
→ grassshan: 養過最柔弱的細胞就牠= = 02/20 22:25
※ 引述《pets910011 (Littlebo)》之銘言：
: 各位大大好，敝人最近開始養3T3-L1細胞，但在加入分化劑後群聚的細胞有些部分會往旁
: 邊散開變成一個洞(一加入分化劑後就去顯微鏡下觀察到的現象)，想問是否是因為細胞的
: 數量over-confluent的原因?https://imgur.com/5sJ90o9及https://imgur.com/ycQ4tb0
: 培養條件：
: 細胞數8萬/3.5cm2的well，繼代後隔天等貼盤後加入分化劑。
: 分化劑IBMX_O.5mM、DEXA_1uM、INS_1ug/mL
: medium：DMEM/FBS+1%NEAA+L-Glutamine+Pen-Strep。
: 另外有幾個問題想詢問各位前輩：
: 1.請問preadipocyte expansion medium中的BCS血清，可否改用馬血清?
: 2.加入分化劑的那天是為第0天，而在第2天的時候我發現我的細胞還是有持續分裂的狀態
: ，這樣是否代表這盤的細胞已經老化，不會再進行分化了?(代數P+21)
: 3.想請問如附圖的細胞滿度(https://imgur.com/WVe1kvf)是否適合加分化劑了呢?
: 謝謝各位前輩跟救命恩人阿~~~~
: 各位前輩如果還有想提醒的小細節再麻煩您們不吝嗇地提出，謝謝!
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3t3l1的確會有接觸性抑制的問題，但你的細胞還沒到會產生的狀況，會破洞的原因是因為你的分化藥劑有些是用酒精、DMSO、或是hcl buffer配置的，當你直接在well上方加入後會因為密度的關係直接沉降到中央處，造成局部濃度過高而細胞死亡破洞，我都是在約八分滿時候，用塑膠離心管先配置分化藥劑，內含BCS與HG_DMEM及應有的分化藥劑，之後換液時就直接下分化medium下去避免上述問題，之後分化完成要做實驗時也可以先將你的樣品預先加入medium在進行給藥
此外血清對於3t3l1分化成功與否是非常重要的，有些嚴謹的實驗室甚至都用同一批的血清避免影響分化的變因
3t3l1的代數建議落在15代以內，基本上此細胞株的代數會影響到分化率
希望能幫助到你
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