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各位前輩先進好,小弟不才來求教了~ 首先附上一張照片 http://i.imgur.com/UFnGuyH.jpg
我的問題是為什麼膠片的最下面會有一條緊縮的條帶呢? 連ladder都會有一樣的情形,所以猜測是膠片本身的問題,但實在不知道問題出在哪... 我的stacking gel是4%,saparation gel是12%。 stacking gel buffer成分是0.5M的tris, 0.4% TEMED, pH 6.8 separación gel buffer成分是1.5M的tris, 0.36% TEMED, pH 8.8 acrylamide是SERVA出的40% Acrylamide-Bis 凝膠時間各30分鐘,用isopropanol壓膠 電泳條件是120~150V跑兩小時(每次電壓都不太一樣,但都是單一電壓跑到底) 大概就是這樣,請大大們提供些意見,感激不盡QQ ----- Sent from JPTT on my HTC_U-1u. -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 140.112.60.35 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1582526654.A.104.html
shenhsu: 最下面那條...loading dye? 02/24 14:57
shenhsu: 所有分不開的小分子也都會在那最底下吧...? 02/24 15:00
lemonteas: 看marker好像還沒全部跑開,所以會擠在一起 02/24 17:39
lemonteas: 你要的大小有出來的話,那條不用太在意 02/24 17:41
KittyGod: 正常 給你看看有無跳海用 02/25 00:32
mcy0326: 正常吧,不然怎麼知道跑到哪裡了 02/25 18:27
xxtomnyxx: 你的Marker是10-180總共10個條帶的那個嗎? 02/26 00:38
xxtomnyxx: 如果你要看的蛋白是 >25 kDa,那就不影響,不用在意這 02/26 00:40
xxtomnyxx: 個問題,除非你要看的蛋白質有<25 kDa的才要煩惱。 02/26 00:40
xxtomnyxx: 不過.....我猜你的gel buffer是用acetic acid調pH的? 02/26 00:41
yaliu: 正長阿,沒染就有那條了不是?就看電涌跑到哪而已阿 02/27 19:51
yaliu: 送出後才發現錯字好多XD 02/27 19:51
abbydu: 正常啊 你第一次跑? 02/28 15:17
machin: 最下面那條線...不是叫leading dye嗎? 03/04 15:19
machin: 理由同Ki跟mcy大 03/04 15:19
xxtomnyxx: Dye在染色的過程有可能被洗掉,而且marker也有,一般 03/04 17:07
xxtomnyxx: marker是不會加loading buffer的,正確的說那條線是 03/04 17:07
xxtomnyxx: leading ion的最尾端,所有跑的比trailling ion慢的蛋 03/04 17:14
xxtomnyxx: 白質都會被擠在這個交界 03/04 17:15
xxtomnyxx: 更正,所有跑的比trailing ion "快"的蛋白質 03/04 17:15
xxtomnyxx: 其實SDS-PAGE的原理比一般認知的要複雜的多,大多數人 03/04 17:17
xxtomnyxx: 可能都是學「蛋白質因SDS而帶負電所以在電場中往正極 03/04 17:18
xxtomnyxx: 跑」。但是根本不是這麼一回事,蛋白質帶負電是必要條 03/04 17:18
xxtomnyxx: 件,但不是充分條件 03/04 17:19
yaes111: loading dye 03/09 16:17
yayayoyi: protein degradation 03/13 00:04
best0329: 這很正常,就是loading dye,覺得看了很不爽可以跑久一 03/22 13:10
best0329: 點把它跳海跳掉 03/22 13:10