[求救] 請問如何鑑定peptide是否coating在96孔盤

[tychang314 (誠實可靠小郎君)]

如題

實驗室目前想測量部分抗體於血液中是否有反應

而偵測抗體方式選用ELISA

目前的問題是抗體由於是自製的疏水性蛋白無法確認透過之前的方式
是否能成功coating在96孔盤上

而實驗並沒有該蛋白 positive control進行測試

請問有辦法知道我的盤子是否有辦法知道我的盤子是否有coating好
或是相關的經驗

目前確認因為coating的抗原量過少(用其他不同確認有反應的的抗原測試)
在HPLC或是直接對盤子進行抗原的成色都與Background差不多




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→ gundamhaha: 蛋白有tag嗎？
→ tychang314: 沒有
推 BJ1014: 用ninhydrin test 做個peptide的濃度回歸 再用你coat的96
→ BJ1014: 孔盤 測coating量
→ tychang314: 其實之前有嘗試過ninhydrin了 但是好像呈不了色
→ tychang314: 其實之前有嘗試過ninhydrin了 但是好像呈不了色
→ tychang314: bradford也是
推 BJ1014: 1.其實ninhydrin要在pH5附近呈色,還有呈色的條件環境其實
→ BJ1014: 有點難抓，要靠自己...。2.靠靜電coating oligo的分子本
→ BJ1014: 來就不好扣，萬一都扣不成功，你只好用表面改質法，在plat
→ BJ1014: e上coat APTMS，再用戊二醛鍵結peptide，不過這算是化學
→ BJ1014: 材料領域的技術...你也要自己想辦法了
→ turtle24: 以前的實驗室會fusion一個無關的蛋白質
推 s505015: bca
→ tychang314: 謝謝個位
→ ad1980: 我們是做成 GST fusion，但問題是你無法知道 GST 在下面，
→ ad1980: peptide 有露出來，有可能是 peptide 被 GST 蓋住。