作者kaofei (phoebe)
看板Biotech
標題[求救] 抽genomic DNA無法去除RNA contamination
時間Sun Jun 14 23:03:03 2020
想請問我抽DNA phenol-chlorform extraction 又 EtOH precipitation完後
無論是用ddH2O或TE buffer 回溶
加入RNase A (1 mg/ml) 後都會出現一些白色棉絮樣無法溶開的沈澱物
屢試不爽
37度兩小時做用完後,phenol-chloroform extraction時
這些沈澱物會存在interphase
取水層進行EtOH precipitation,最後回溶在ddH2O
Nanodrop 260/280, 260/230都很漂亮,都在2左右
但將Nanodrop的值跟Qubit assay相比發現有嚴重的RNA contamination
Nanodrop/Qubit > 10以上
想請問RNase A treatment的消率有多好?
有可能因為RNA量過高導致RNase A digest不完嗎?
還是有什麼可能的原因造成RNase被抑制?
因為照著protocol做,其他人都沒有RNA污染的問題,但我暫時也想不出哪裡有問題
還請大家幫忙解惑
謝謝!
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推 agagy: 其他人沒問題,要馬拿別人的試劑來做,要馬請別人抽你的 06/16 20:23
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