→ xxtomnyxx: 還是那句老話：問問題請把問題描述清楚。 10/23 11:02
→ xxtomnyxx: 1. 雜band？是做什麼實驗的？切 RE？PCR？WB？ 10/23 11:02
→ xxtomnyxx: 2. 你給的圖上沒有T7 promoter(雖然我看的出來在哪裡) 10/23 11:02
→ xxtomnyxx: ，請你標記好。 10/23 11:02
→ xxtomnyxx: 3. 在問這個問題前，你有先去理解過WB的原理嗎？如果 10/23 11:02
→ xxtomnyxx: 有，請問你用什麼一抗？ 10/23 11:02
推 Marriott: 你是有refolding相關需求才用pET32a? 若不是，你要想 10/23 11:02
→ Marriott: 想到時候你目標蛋白N段前面可是會多不少東西啊 （前面 10/23 11:02
→ Marriott: 已經有atg，你加不加都無所謂），到時候還要多一道切的 10/23 11:02
→ Marriott: 步驟 10/23 11:02
→ xxtomnyxx: 如果你希望insert獨立做出一個蛋白，那除了ATG以外還 10/23 11:10
→ xxtomnyxx: 要放Shine-Dalgarno sequence，而且還要放stop codon 10/23 11:10
→ xxtomnyxx: 終止前面TrxA蛋白的轉譯；如果你要做一個insert和TrxA 10/23 11:10
→ xxtomnyxx: 的fusion protein，那加不加ATG都無所謂。 10/23 11:10
→ nm768417: 感謝各位大神回覆，抱歉可能我問題沒有問的很清楚，我 10/23 11:44
→ nm768417: 的質體目的是想做出insert的獨立蛋白，進而表達出抗原然 10/23 11:44
→ nm768417: 後去偵測血清中的抗體，然後有看到回覆的留言，有看到要 10/23 11:44
→ nm768417: 加入shine-dalgarno sequence還有stop codon，我想請問 10/23 11:44
→ nm768417: 一下這個要怎麼加入到insert上，加上去的話的順序是stop 10/23 11:44
→ nm768417: codon-酵素切位-shine-dalgarno sequence-AUG-insert 10/23 11:44
→ nm768417: 嗎，抱歉我是菜鳥大學生 10/23 11:44
→ Ice9: 等等，大學生？實驗室沒有前輩嗎？ 10/23 16:36
→ nm768417: 實驗室沒有碩生跟博生也沒有助理 10/23 17:51
→ Ianthegood: 老闆放生嗎?這大概是碩班題目的難度? 10/23 22:08
推 tynse71864: 等等沒有碩博也沒助理只有專題是怎樣囧 10/24 00:09
→ rebirth: 你要不要換實驗室比較快阿 10/24 10:09
→ rebirth: expression vector基本設計問題實驗室沒人可教只能上網 10/24 10:11
→ rebirth: 問網友... 10/24 10:11
→ tynse71864: 但還是想辦法解決下好了 是說 stop 跟 start codon 10/25 13:06
→ tynse71864: 應該寫反了？ 10/25 13:06
推 tynse71864: 喔我看錯了, 你寫的應該是對的， insert尾巴還要再一 10/25 13:10
→ tynse71864: 個stop。另外跑膠理論上只會有一個 band 但實際上要 10/25 13:10
→ tynse71864: 跑了才知道 10/25 13:10
→ nm768417: 感謝樓上大神指導，那stop codon要怎麼加上去？因為是 10/25 14:29
→ nm768417: 酵素切然後黏上去vector上，這樣不是要加在6-his tag後 10/25 14:29
→ nm768417: 面嗎？ 10/25 14:29
→ xxtomnyxx: 單就這個 vector 的設計和製做大概是大學專題生水準， 10/25 15:16
→ xxtomnyxx: 包含血清測試整套做完差不多就是碩班題目。你現在大幾 10/25 15:17
→ xxtomnyxx: ？原核生物的轉錄轉譯調控學過了嗎？知道 ORF 的 frame 10/25 15:18
→ xxtomnyxx: 是什麼嗎？知道你的程度比較方便告訴你要怎麼做。 10/25 15:19
推 vivitune: 5’-切位-start-你的基因-3’ 10/25 20:02
→ vivitune: 5’-切位-stop-你的基因-3‘ 10/25 20:02
→ Ice9: 問網友反饋花的時間比較長。試試找其他實驗室學長姐會比較 10/25 21:03
→ Ice9: 快。另外，現階段你需要那些背景知識也可以由他們協助。 10/25 21:03
推 rasaze: 良心建議既然實驗室放生你，就放生實驗室吧，把時間拿去 10/31 14:44
→ rasaze: 補充基本知識甚至精進英文也比在這間實驗室浪費時間好 10/31 14:44