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如題 最近在做4株backbone相同 不同位置的點突變 但transform後colony的定序結果 在應該突變的位置都會有primer的插入且有長有短 一個點突變做了2 3次 每次都送3 4顆都有相同結果 不知道有沒有人遇過並如何解決 感謝 P.S ploymerase用的是KOD Competent cell 用的是DH5a ----- Sent from JPTT on my iPhone -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 49.216.39.161 (臺灣) ※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1616834099.A.231.html
shofu0913: 補充一下 03/27 16:38
shofu0913: Primer大概33~35bp 03/27 16:38
shofu0913: GC content大約都50% 03/27 16:38
blence: 是不是最後有加ligase,造成primer insertion? 03/28 01:42
blence: 如果是complementary primer,是對應到ligation-free的SDM 03/28 01:43
Ice9: 有長有短是指 primers的量嗎? 03/28 17:27
shofu0913: b大 確實有加ligase 下次試試看ligase free的 03/28 19:13
shofu0913: 覺得奇怪的點是因為 03/28 19:13
shofu0913: 實驗室protocol都是這樣做的 03/28 19:13
shofu0913: 我先前也做過類似的實驗也都有成功 03/28 19:13
shofu0913: 有長有短是指primer insert的重複次數 03/28 19:13
blence: 跟早期比現在SDM有各種改變了,要不要加ligase 03/28 22:29
blence: 要看你們的primer是對應哪種protocol的設計 03/28 22:30
Ice9: 那 primer orientation都一樣嗎?還是有特殊規律? 03/28 22:46
osla30: 是BlacktoBack還是QuikChange方式? 03/29 08:58
osla30: 打錯,是BacktoBack 03/29 08:58