THP-1誘導發炎體

[crystalwu (婧啵)]

請問板上各位大大有沒有人做過THP-1巨噬細胞發炎誘導？
目前已經有將他分化成巨噬細胞貼盤了 細胞鏡檢狀態沒有太大問題
但以LPS/ATP誘導難以有大量發炎因子產生（目前都只有先測IL-1beta)
現使用 1 ug/mL誘導6小時後添加5 mM ATP培養1小時，是查到相關資料中普遍使用條件
懇求有相關經驗的神人指點一二

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→ NINJA999: 你的檢測方法是什麼？你想看的發炎因子是什麼？你目前
→ NINJA999: 的誘導方式是讓細胞進行pyroptosis ，也許細胞死光了也
→ NINJA999: 不一定。單純的給LPS應該就可以誘導發炎了
→ crystalwu: 目前是以ELISA kit測IL-1beta跟TNF-alpha,確實沒有想過
→ crystalwu: 焦亡這方面 我下次試試下LPS就好
→ crystalwu: 另外想請教誘導成功是否會在形態上有明顯變化？變成梭
→ crystalwu: 形？
推 NINJA999: 我自己是用LPS/IFNg誘導細胞變成M1型態，細胞會變的更
→ NINJA999: 平更大，反而不會是梭狀。
→ crystalwu: 瞭解～請問您的經驗是加了IFN-gamma才成功嗎？
→ NINJA999: 我主要是做macrophage的極化，所以給LPS+IFNg, 誘導成M1
→ NINJA999:  macrophage, 在我的實驗中，NLRP3, IL1b的蛋白質表現
→ NINJA999: 都蠻明顯的，另外TNFa, IL6的RNA也都有明顯表現。
→ crystalwu: 瞭解感謝！另外我今天看我分化兩天後的細胞 發現有很多
→ crystalwu: 空泡產生 可能真的在誘導前就讓細胞死亡了？不知道您會
→ crystalwu: 不會產生這樣的現象呢 https://i.imgur.com/fZfoS96.jp
→ crystalwu: g
→ NINJA999: 妳的分化條件是什麼呢？我分化之後，沒有像妳那樣的空泡
→ NINJA999:  https://i.imgur.com/g8zirNB.jpg
推 b0109135: 我inflammasome也是用LPS/ATP刺激, 依你用il1b ELISA測m
→ b0109135: edium中含量看似沒有問題，ATP可以檢查看看有沒有壞，AT
→ b0109135: P也可以換成nigericin。給你參考
推 surgeon999: 小弟弱弱借問thp1，前3hr LPS（10ng/ml)刺激後1hr Nig
→ surgeon999: ericin (20uM)結果WB看inflammasome 相關分子表現都下
→ surgeon999: 去，求解～
推 b0109135: 回覆999: 看NLRP3 活化最直接就是去看IL1b 有沒有releas
→ b0109135: e(p20),可以做ELISA或是 medium 的TCA沉澱，最近pyrptos
→ b0109135: is 蠻夯的看GSDMD切割也行，都是CASP1的下游。 做inflam
→ b0109135: asome 活化第一次建議做- -，+-，++（LPS &Nig)的contro
→ b0109135: l 檢查。 如果你加LPS 後NLRP3沒有起來 建議加大濃度或
→ b0109135: 放久一點。跟你指導老師或老闆多討論才是最重要的。
推 surgeon999: 謝樓上大大，事實上我有試過純加LPS是都有起來的（ex:
→ surgeon999: IL-1b, NLRP3)但神奇的地方在於加了Nigericin後，訊號
→ surgeon999: 是變弱的～ 照理說它是inflammasome 的activator才對
→ surgeon999: ，甚至GSDMD沒啥變化Q，那個TCA沈殿似乎蠻有意思從沒
→ surgeon999: 想過～想多了解>< BTW ELISA的結果都跟WB一致（IL-1b)