[求救] 免疫螢光染色問題

[small3chiu (山邱)]

年前做了mitotracker（cell signal #9082)去染細胞的粒線體。
做完大概隔一個禮拜上confocal，結果不管是什麼處理看紅色螢光時背景都會一點一點的
，不確定是什麼原因。

https://i.imgur.com/pjRja3s.jpeg

細胞養在 chamber slide

步驟：
1. 依照條件在收細胞前45 min加入mitotracker
2. Wash 3次
3. -20度 methanol 固定15min
3. Wash 3次 5 min
4. 加入0.2% Triton 15min
5. Wash*3
6. 3% BSA block 1hr
7. Wash*3
8. DAPI 10min
9. Wash*3
10.拔chamber 封片
11. 避光存放在4度


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 223.136.129.241 (臺灣)
※ 文章網址: https://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1738637225.A.D5B.html
→ Bows: Mitotracker 很難長時間儲存，染完最慢隔天就要處理了，放
→ Bows: 越久越容易有問題
→ small3chiu: 好的 我再弄新的試試，感謝提點
推 tynse71864: 你有要染其他抗體嗎？ 沒有的話 PFA後面可以全部省略
→ tynse71864: 掉
→ tynse71864: 同 B大  這種mito tracker 或 LysoTracker都是尤其細
→ tynse71864: 胞活著時的電位差或 pH值才會發光  所以 fix後效果都
→ tynse71864: 會相對不好 (或沒訊號)
→ tynse71864: 然後 dye可以全速離一分鐘拿上清去染  避免一些保存久
→ tynse71864: 導致的沉澱