［請益］uv-vis定量問題

[chnctu5566 (回家吧)]

各位好

本小魯做實驗時，需用特定波長的uv吸收度來定量其中所含的金屬離子的量。
一直以來都是以積分面積來算其濃度為何。（指導教授不清楚uv的理論）
但近日來，被一位中部國立中字輩的學長告知我的定量方法是錯的！
此學長，說吸收度即為濃度！而且他大學的儀器分析也是這樣教！
若按照學長的說法，我的實驗將會出錯

故來此請教uv-vis 定量的問題。

謝謝

手機發文！若有排板不好！敬請諒解！

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→ Navarro: 不如把你定量的方法說來聽聽?
→ chnctu5566: 先配置1M的硫酸當reference ,先測量1000ppm的標準品。
→ chnctu5566: 此標準品會在312nm有一個峰值出現，積分此峰面積並訂
→ chnctu5566: 此總面積為1000ppm.再將此標準品稀釋成500ppm,250ppm
→ chnctu5566: 與125ppm，再積分其面積。其總面積為1000ppm的0.493，
→ chnctu5566: 0.248與0.123。再測試樣品，將樣品312nm位置的總面積
→ chnctu5566: 與1000ppm的面積去對比，進而得到其濃度！
推 YJM1106: 你當你指導教授是學店出來的？ 隨便都是phD怎麼可能不懂u
→ YJM1106: v
→ chnctu5566: Y大！謝謝你的指教！我老師是做理論的，但想要將理論
→ chnctu5566: 計算和實際所做的對比！而原本我所使用的方式老師覺得
→ chnctu5566: 沒有問題。但學長來一起討論後，提出用吸收值即可直
→ chnctu5566: 接做為濃度的指標。但是我將濃度吸釋到200ppm以後，
→ chnctu5566: 其吸引質卻比300ppm的高（積分面積是符合的）！但卻被
→ chnctu5566: 質疑我濃度配錯（我配了10組做比較，互有高低）！因
→ chnctu5566: 為有所疑惑才上來問問版上能否解答！
→ tpo3: 檢量線：測量不同濃度與blank在特定波長下的吸收，然後找出
→ tpo3: 訊號與濃度的關係，此時即可知道偵測極限與線性關係為何
→ tpo3: 然後可以檢測自己配量的濃度，來測試檢量線的準確度
→ tpo3: uv吸收關鍵字：beer's law，濃度夠低時才適用
→ tpo3: 當然，待測樣品濃度應落在檢量線內
推 YJM1106: 你的待測物一定跟溶劑有很強的交互作用，才會分裂成一個
→ YJM1106: 能帶，變成吸收峰的狀況
→ YJM1106: 不然一般都是取最大吸收波長就好了
→ YJM1106: 兩種算法R平方是多少呢？ 我覺得選高的那個做XD
→ chnctu5566: 謝謝T大！但我的樣品20ppm以下時，peak就完全偵測不
→ chnctu5566: 到了！
→ tpo3: 意思就是你的偵測極限或者誤差在 20 ppm 以上
→ chnctu5566: 謝謝Y大！積分面積30ppm~500ppm R 平方是0.91！吸收
→ chnctu5566: 度100ppm~500ppm R 平方是0.81(若是30ppm~500ppm是0.6
→ chnctu5566: 2）
→ tpo3: 在我個人的認知中，要做準確的定量的話，檢量線要三個九以上
→ tpo3: 也就是R2=0.999以上
→ tpo3: 從你參考
→ tpo3: 抱歉，供你參考
→ chnctu5566: t大謝謝！我自已做icp時檢量線確實做到0.9999！用uv
→ chnctu5566: 做檢量線時，連0.99都做不到！而我只是要找出最佳的
→ chnctu5566: 鑑定方法！將其濃度帶入理論方程式中
→ tpo3: 最後1點，若是用UV定量，吸收度須在1以內才會準確
→ jerry9437: 嗯? 所以你的待測物不能用A=εbc算嗎? 有差異?
→ BEERboy: 去讀一下beer's law對任何光譜學都有幫助
→ BEERboy: 但也須留意一下你的溶解背景吸收
→ BEERboy: 判斷了溶劑吸收情形才知道該用什麼光譜偵測
→ YJM1106: 交互作用吧～電子能階變成電子能帶了XD
→ tony15899: uv-vis不是用分光光度計? 怎麼還會有積分面積
→ chnctu5566: Jerry大！算過了，有誤差！
→ chnctu5566: Tony大！我不懂你的意思！ 我的圖譜類似這樣 http://i
→ chnctu5566: .imgur.com/xKQ0C3U.jpg 。
→ chnctu5566:  http://i.imgur.com/64nvdnV.jpg
→ tony15899: 這是掃吸收光譜的圖吧    uv-vis通常用吸收最高處波長
→ tony15899: 去測 以你那張圖看大概630nm左右的地方
→ faniour: 分光光度計跟UV-Vis是不同的東西
→ faniour: Beer's law 定量要0.3以下，成分單一
→ faniour: 會隨濃度產生平衡物種的不適用
→ faniour: UV-Vis可以做的很準，都可以是HPLC的偵測法之一了
→ faniour: 0.91對定量來說，沒什麼意義
→ chnctu5566: 謝謝各位的答覆！我還是採用學長說的直接用吸收度好了
→ chnctu5566: ！雖然R平方只有0.6，但至少不會一直被刁這個問題！
→ faniour: .......
→ chnctu5566: 一直被這問題釘在台上，我也很無奈！還是妥協好了！
→ chnctu5566: 不然在我的系統中，個人還是比較相信積分面積！
→ faniour: 2個都不是很正確
→ faniour: 去看一下Beer's law有這麼困難嗎？
→ faniour: 積分面積不是全然沒理，如果你真的清楚自己在做什麼
→ faniour: 以UV 定量金屬離子是傳統分析了
→ faniour: 有沒有物種干擾，濃度範圍是否正確，取析收小於0.3
→ faniour: 是希望穿透要大於0.5
→ faniour: 避免分析物自己的作用，有些成份穿透到0.9都會做用
→ faniour: 不管是什麼，用線性區去定量是基本的
→ faniour: R到0.61，線性都不線性了還套什麼式子
→ faniour: 前面有人提到能階變能帶，這是也許可以積分的原因
→ faniour: 就巨觀來說能帶的分佈受物種跟環境控制，積起來是1
→ faniour: 但是你也只拿到R=0.91
→ faniour: 配已知液試看看標準添加法吧
→ chnctu5566: F大！謝謝你的回應！我的樣品所測出的皆是以能量帶的
→ chnctu5566: 方式所展現！我的樣品放置於空氣中或進行稀釋時，皆
→ chnctu5566: 有還原現象產生。當還原現象產生時，在254nm的位置會
→ chnctu5566: 有多ㄧ隻peak! 我舉個例子！若我一開始配置的是200ppm
→ chnctu5566: 的溶液，在324nm的位置其吸收度與積分面積分別為1與10
→ chnctu5566: 0！當我放置1天後或將其稀釋為1/5時！在254nm會多生
→ chnctu5566: 成一隻peak!此時324與254的吸收度分別為0.55與0.15！
→ chnctu5566: 而積分面積分別為72.8與27.1！
→ chnctu5566: 故以我所做的實驗來看！吸收度並不合適做為依據
→ chnctu5566: 此外關於r平方！若是用254與324的總面積來看！r平方=0
→ chnctu5566: .998
→ faniour: 還是建議你花點時間看一下beer's law, 中文資料不少
→ faniour: 還有濃度定量的手法
→ faniour: 看你的描述真的覺得問題不少，或是請教化學系分析組
→ faniour: 的人，自己的研究還是謹慎點
→ faniour: 投稿期刊這種手法容易被攻擊而忽略研究本身的意義
→ faniour: 樣品常常是現配現用，壞掉是你的責任
→ faniour: 稀釋會變表示樣品有交互作用
→ faniour: 溶液中常是能帶，吸收還是能用，能帶只是用積分的
→ faniour: 一點理由不是這樣就此解套
→ faniour: 以上，FYR
→ jerry9437: 嗯 如果你提出在空氣中會壞的問題 就容易被質疑東西不
→ jerry9437: 同 已經不是原先的物質 即使能用面積算 也會被講不同
→ jerry9437: 因為對你來說那是事實 但會多根peak就代表兩者之間有差
→ jerry9437: 不能視為同樣的待測物
推 teardropbox: 直接標準品做檢量對照濃度就好 uv-vis濃度低誤差大
→ teardropbox:  金屬為何不用燒的？AA or ICP
→ faniour: 不是做儀分的會有這兩設備嗎？做儀分會問這個問題嗎？
→ faniour: UV能測多低要看待測物的吸收係數大到什麼程度
→ faniour: 金屬離子有幾百幾千的，也有到幾萬的，常配到mM