[求救] 如何更清楚分出band

[xy234786 (阿亮)]

如圖，我想要分出21 ,19 , 22kda之蛋白，我用的條件是上膠4%膠(30V)，下膠16%(30mA)
，使用的buffer有分陰陽極，因為參考一篇paper tricine gel的配方去跑的，跑的有點
醜，只看到兩條，若想看到第三條，可以怎麼改良呢？
http://i.imgur.com/8OpBddN.jpg

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→ Ianthegood: 更高的%
→ milkpa: 更低的A/V，略低的蛋白質濃度，well的大小
推 joseph103331: 用低溫去跑 設備允許可以試試用更長的膠跑
→ blence: 這圖完全不像16% protein ladder該有的樣子,這gel不是沒跑
→ blence: 開到底,就是配製有誤或非鮮配;可以google survivin圖參考
→ blence: 前面#1PUWW0Kx提到用12%跑,還比這篇的ladder拉得更開
→ xy234786: survivin?
→ jsi: 樓樓上在說啥?
→ Ianthegood: isotype吧
推 joseph103331: 真的是survivin，是一種抗凋亡蛋白質(是說名字就很
→ joseph103331: 有這種感覺了)
→ joseph103331: 大小剛好是本文提到的，所以應該有很高的參考價值
→ xy234786: https://i.imgur.com/UhrQSSn.jpg
→ xy234786: 我翻了實驗室之前的論文，大概就要做到這樣
→ aj1139: 雖然本文是問怎麼把band跑開，但看到之前的data，我建議
→ aj1139: 不要用SDS-PAGE，這三個多肽太接近了。跑個液相層析之後
→ aj1139: 送去打mass比較好。
推 uouim: 推薦用12% Bis-Tris 的預製膠搭配 MOPS buffer。
推 jockersung: 16或20%膠試試 然後設60-80V慢慢跑看看